マウス坐骨神経におけるNAD +とその代謝産物の定量化
2024年4月10日
紹介
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD +)とその代謝産物の重要な部分は、老化および神経変性において広く認識されています。老化および神経変性疾患を標的とする生化学的研究および介入への進歩を促進するために、NAD +サルベージ経路におけるNAD +とその代謝物レベルを正確に定量することは非常に重要です。ここでは、頑健で正確なLC-MS/MS法を適用して、正常および損傷したマウス坐骨神経におけるNAD+とその代謝物レベルを定量化します。NAD +とその代謝産物を定量するための既存の方法の限界
HPLC-UV、NMR、キャピラリーゾーン電気泳動、比色酵素アッセイなど、NAD +とその代謝物を定量する従来の方法は、感度、選択性、および間接測定においてさまざまな課題に直面しています。細胞または組織の NAD+ およびその代謝物測定のための既存の LC-MS/MS アッセイには、実行時間の延長、クロマトグラフィー保持挙動の不良、不十分なピーク形状など、克服すべき多くの困難がまだあります。さらに、NAD +サルベージ経路の1〜3つの物質のみがこれらの方法でカバーできます。LC-MS/MS法の改良
既存のLC-MS/MSアッセイに基づいて、クロマトグラフィー条件、サロゲートマトリックス、MS/MS条件に関する修正が行われます。具体的には、移動相添加剤として 5 μM のメチレンホスホン酸が採用されており、シグナル強度とピーク形状を明示的に促進します。サンプルが比較的クリーンでシンプルであることと、サイズが小さいことから、超純水は代替マトリックスとして試験されます。親水性相互作用液体クロマトグラフィーカラムおよびハイパーカーボトカラムの代わりに、Waters Atlantis Premier BEH C18 AX カラムが採用されており、その独自の MaxPeak HPS 高性能表面テクノロジー(カラム内壁の不動態化、金属表面の除去)により、すべての分析種の高い再現性、ピーク対称性、ベースライン分離が可能です。さらに、MS条件は、cADPRおよびニコチンアミドモノヌクレオチド(NMN)の応答を維持しながら、環状アデノシン二リン酸リボース(cADPR)チャネルのNAD+干渉シグナルを最小限に抑えるように最適化されており、イオンスプレー電圧は4000V、ターボヒーター温度は450°C、ガス1は50psi、ガス2は50psi、カーテンガスは30psi、衝突ガスは12psiです。
神経サンプルの代表的なクロマトグラム(正常 vs 負傷)
5 つの分析種すべてがベースライン分離を達成し、cADPR は神経変性モデルにおける高感度バイオマーカーです。ここで、坐骨神経軸索切開術は軸索変性を誘発し、損傷した神経のNAD +レベルの低下とNMNレベルの上昇をもたらし、NMN / NAD +比が約2倍に増加します。同時に、ニコチンアミド(NAM)とアデノシン二リン酸リボース(ADPR)のレベルは約2倍に減少し、cADPRレベルは8倍以上に増加します。これらの結果は、以前に報告された研究の結果と一致しており、NAD+ とその代謝物の定量におけるこの修正 LS-MS/MS 法の精度を検証しています。
結論
この改良型 LC-MS/MS 分析法により、NAD+、NMN、NAM、ADPR、および cADPR の効果的なベースライン分離が 5 分という短い時間で可能になり、さまざまな神経疾患の早期診断や老化疾患や神経変性疾患の医薬品開発に貢献します。参考
Ma Y、Deng L、Du Z.マウス坐骨神経におけるNAD +および関連代謝物を定量化するためのLC-MS / MS法の開発と検証、および神経損傷動物モデルへの応用。J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821ボンタックナド
BONTACは、2012年以来、コエンザイムおよび天然物の原材料の研究開発、製造、販売に専念しており、自己所有の工場、170以上のグローバル特許、および強力な研究開発チームを備えています。BONTACは、NADとその前駆体の生合成において豊富な研究開発経験と高度な技術を持っています。NMNおよびNR)。NAD ERグレード(エンドキシンの除去)、NADグレードI(IVD/栄養補助食品/化粧品未加工粉末)、NADグレードII(API/中間体)、NADグレードIV(溶解性に対するより高い要件がある場合)など、凍結乾燥粉末または結晶性粉末の形で提供できるさまざまなタイプのNADがあります。BONTAC NADの純度は98%以上に達することができます。
