1月 1日
デング熱NS1タンパク質の決定におけるチオ‐NADサイクルによる超高感度ELISAの並外れたメリット
1. はじめに
デング熱は、デング熱ウイルス感染したネッタイシマカ種(Ae. aegyptiまたはAe. albopictus)蚊の咬傷を通して、高熱、めまい、頭痛、発疹などの主な症状を伴う重度痛み(目、筋肉、関節、骨の痛み)などこの病気は熱帯および亜熱帯気候で広く蔓延しています。毎年推定100〜4億人が感染しており、その80%以上は通常軽度で無症状です。それにもかかわらず、重度のデング熱は適切に治療しないと死亡リスクを高める可能性があります。したがって、この病気の早期診断は、タイムリーな治療にとって重要です。注目すべきは、高度に保存された糖タンパク質である非構造タンパク質1(NS1)は、主に感染中に分泌されます。デング 熱ウイルス、これはの主な病因として集中的に考えられています。デング熱.したがって、NSI は一般に、この病気を早期に発見するためのバイオマーカーとして使用されます。
本研究では、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISAの)と組み合わせてチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(チオ-NAD/S-NAD)サイクリング方式(以下、超高感度ELISAと呼びます)を利用してNSIを検出し、NAATと比較して検出精度を確認します。
2. 従来の検出方法の長所と短所デング熱
現在、tここでは、主に4つの検出方法を紹介します対して デング熱。
ウイルスの分離と同定は特異性が高いですが、時間がかかり、少なくとも5日かかります。迅速抗原検査は、他の方法の中で最も速く、最も費用対効果が高いですが、感度と特異度は比較的低いです。IgM および IgG に基づく血清学的検査は、感染日数によって制限されます。ザ抗体のレベルが検出可能なレベルまで上昇するまで、検査を遅らせる必要があります。
クリニックでは、NAATがしばしば適用されて決定されますデング熱その高い感度と特異性の汚れによって。ただし、この方法は費用がかかり、手間がかかり、偽陽性が発生しやすいため、訓練を受けた担当者が実施する必要があります。これらの方法の欠点を克服するために、新しい検出方法超高感度ELISAは この研究に適用されました。
3. チオ-NADサイクリングによる超高感度ELISAのワークフロー
抗体のペアですサンドイッチELISAおよびアルカリホスファターゼのNS1タンパク質を捕捉するために使用されますです二次抗体に標識されています。抗体の他に、アンドロステロン誘導体、3α-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、チオ-NAD、およびNADHアールチオ-NAD酵素サイクルシステムの構築に使用されます。チオ-NADサイクル反応中、チオ-NADHは三角数で絶えず蓄積し、405 nmの吸光度で直接測定できました.
4. デング熱NS1タンパク質の検出における超高感度ELISAとNAATの比較
NAATでは、60検体がデング熱陽性、25検体がデング熱陰性である。これらのデング熱陽性検体のNAATサイクル閾値(CT)値は12.42から31.41の範囲でした。超高感度ELISAでは、59個の検体がNAATの結果に対してそれに対応して陽性であるのに対し、25個の検体はNAATの結果に対して完全に陰性です。NAATと比較して、超高感度ELISAの感度と特異度はそれぞれ98.3%と100%です(表2)。NAAT で確認されたデング熱陽性患者検体 60 件のうち、超高感度 ELISA で陰性である検体は 1 件のみです。NAATデータによると、検体はCT値21.59の4型DENV感染症例である。超高感度ELISAの結果はNAATの結果とほぼ完全に一致しており、カッパ値は0.972(95%CI:0.917-1.0).
5. まとめ
超高感度ELISA法は実行が簡単で、操作に専門の研修生は必要ありません。検出は、少量のサンプルを受け取った後すぐに開始できます。低所得国におけるデング熱の早期発見に特に適しています。参考
Chen, Po-Kai et al. 「チオ-NADサイクリングによる超高感度ELISAを用いたデング熱NS1タンパク質の高度な検出法」。ウイルス、vol.15,9、1894年。2023年9月8日、 doi:10.3390/v15091894製品の利点と特徴BONTAC チオ-NAD/S-NAD
ボンタック はo数少ない企業のうちのNE中国チオNADを生成できるもので「ボンザイム」全酵素法(環境にやさしい;有害な溶剤残留物なし) と 独自の「ボンピュア」7段階浄化技術。BONTACは、研究開発、生産、販売を統合します。 製品の高品質と安定供給を保証するための自社所有工場と多数の国際認証.