1月1日
デング熱NS1タンパク質の決定におけるThio-NADサイクリングを用いた超高感度ELISAの並外れたメリット
1. イントロダクション
デング熱は、デング熱によって引き起こされる急性感染症です。デングウイルス感染したネッタイシマカ(Ae. aegyptiまたはAe. albopictus)の蚊に刺されることで、高熱、めまい、頭痛、発疹などの主な症状があります。重度痛み(目、筋肉、関節、骨の痛み)などこの病気は、熱帯および亜熱帯の気候で広く蔓延しています。毎年推定1億人から4億人が感染しており、その80%以上は通常軽症で無症状です。それにもかかわらず、重度のデング熱は、適切に治療しないと死亡のリスクを高める可能性があります。したがって、この疾患の早期診断は、そのタイムリーな治療にとって重要です。注目すべきは、高度に保存された糖タンパク質である非構造タンパク質1(NS1)は、主に感染中に分泌されることです。デング 熱ウイルスこれは、主な病因因子として集中的に考えられています。デング熱.したがって、NSIは一般的にこの疾患の早期発見のためのバイオマーカーとして使用されます。
この研究では、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISAの)と組み合わせてチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(チオ-NAD/S-NAD)サイクリング方法(以下、超高感度ELISAと呼ぶ)を使用してNSIを検出し、その後、NAATと比較してその検出精度を確認します。
2.従来の検出方法の長所と短所デング熱
現在、tここでは、主な検出方法を4つ紹介します対して デング熱。
ウイルスの単離と同定は特異性が高いですが、時間がかかり、少なくとも5日かかります。迅速抗原検査は、他の方法の中で最も速く、最も費用対効果が高いですが、感度と特異性は比較的低いです。IgMおよびIgGに基づく血清学的検査は、感染日数によって制限されます。ザ抗体のレベルが検出可能なレベルまで上昇するまで、テストを遅らせる必要があります。
クリニックでは、NAATはしばしば決定するために適用されますデング熱その高い感度と特異性の汚れによって。ただし、この方法は高価で手間がかかり、誤った陽性になりやすいため、訓練を受けた担当者が実施する必要があります。これらの方法の欠点を克服するために、新しい検出方法超高感度ELISAは この研究に適用されました。
3. thio-NADサイクルを用いた超高感度ELISAのワークフロー
抗体のペアですサンドイッチELISAのNS1タンパク質、およびアルカリホスファターゼの捕捉に使用されますです二次抗体に標識されています。抗体以外にも、アンドロステロン誘導体、3α-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、チオ-NAD、およびNADHがありますアールチオNAD酵素サイクリングシステムの構築に使用されます。チオNADサイクリング反応中、チオNADHは常に三角数で蓄積し、405nmの吸光度で直接測定することができました.
4. デング熱NS1タンパク質の検出における超高感度ELISAとNAATの比較
NAATでは、60の検体がデング熱陽性で、25の検体がデング熱陰性です。これらのデング熱陽性検体のNAATサイクリング閾値(CT)値は、12.42から31.41の範囲でした。超高感度ELISAでは、59個の検体がNAATの結果に対応して陽性であるのに対し、25個の検体はNAATの結果に対して完全に陰性です。NAATと比較して、超高感度ELISAの感度と特異性はそれぞれ98.3%と100%です(表2)。NAATで確認されたデング熱陽性の患者検体60例のうち、超高感度ELISAで陰性だったのは1例のみである。NAATのデータによると、検体はCT値が21.59の4型DENV感染例であることが示されました。超高感度ELISAの結果はNAATの結果とほぼ完全に一致しており、κ値は0.972(95%CI:0.917-1.0).
5. まとめ
超高感度ELISA法は、簡単に実行でき、専門の研修医が操作する必要はありません。小さなサンプルを受け取った直後に検出を開始できます。特に、低所得国におけるデング熱の早期発見に適しています。参考
「超高感度ELISAとThio-NADサイクリングを使用したデング熱NS1タンパク質の高度な検出方法」。ウイルス、第15巻、9、1894年。2023年9月8日, doi:10.3390/v15091894製品の利点と特徴BONTAC チオナド/S-ナド
ボンタック はoです数少ない企業のNE中国Thio-NADを生成できるもので「ボンザイム」全酵素法(環境にやさしい;有害な溶剤の残留物はありません) と 独自の「Bonpure」7段階の精製技術。BONTACは、研究開発、生産、販売を統合しています。 自社工場と多数の国際認証により、高品質で安定した製品供給を確保.