生体試料中のNMNを科学的に定量する手法
2024年1月17日
1. はじめに
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD +)のレベルをアップレギュレートするためのニコチンアミドモノヌクレオチド(NMN)の補給は、有望なアンチエイジング介入であることが明らかになっています。しかし、NAD +中間体、特にNMNを正確に定量することは依然として深刻な課題です。この研究は、生体サンプル中のNMNを正確に定量するための新しい方法である二重同位体媒介LC-MS/MS分析法(dimeLC-MS/MS)を導入するためのものです。2. NMNの正確な検出に影響を与える要因
NMNは、酵素分解、サンプル処理における変換、さまざまなカラムおよび抽出条件での複雑な挙動、およびマトリックス効果に対する脆弱性により、正確に検出することが困難です。
具体的には、NMNは極性が高く揮発性が低いという性質があり、水には溶けやすいが有機溶媒には溶けにくいという特徴があります。これらの特性は、多くの従来の定量分析法の適用を大きく制限します。
血液などの生体試料は、CD38とCD73(エクト-5'-ヌクレオチダーゼ)の有意な活性を持っており、どちらもNMNを基質として使用することができます。
カラム中のNMNの挙動は非常に複雑で、おそらくその電荷の二部性のために、抽出とカラム条件の微妙な違いがNMNの信頼性と正確な検出に大きく影響します。
3. インパクトファクターの影響を低減するためのdimeLC-MS/MSの対処法
上記の要因の干渉を避けるために、プロトタイプカラムNMN-2が適用されます。このカラムには、炭素粒子よりも親水性化合物との結合能力が高いC18ベースの高純度シリカ粒子が含まれており、分離能力が向上しています。過塩素酸(PCA)は、血漿などの生体試料からNAD+やNMNを最小限の損失で効率的に抽出できるため、採用されています。
マトリックス効果を調整するために、PCA 抽出の前に、各同位体化合物の一定量(1 μM)を生体サンプルに添加します。
4. dimeLC-MS/MSの利点
LC-MS/MS 駆動法における二重同位体 NMN 標準物質である NMN(M + 14)および NMN(M + 5)は、サンプル処理中の NMN の運命を正確に追跡できるため、生体サンプル中の NMN 測定の精度と信頼性が大幅に向上します。さらに、dimeLC-MS / MSは、さまざまな種類の生体サンプル中のNMNの抽出効率と絶対濃度を評価できます。
5. おわりに
二重同位体NMN標準試料を用いたこの新しいLC-MS/MS駆動分析法は、生体試料中のNMNを正確かつ確実に測定できます。NMN摂取量に関する今後の研究に活用できます。6. 参考
海野 淳也 et al. "Absolute quantification of nicotinamide mononucleotide in biological samples by double isotope-mediated liquid chromatography-tandem mass spectrometry (dimeLC-MS/MS)." npj aging vol. 10,1 2.2024年1月2日, doi:10.1038/s41514-023-00133-1なぜBONTACを選ぶのですか?
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