デングNS1タンパク質の測定におけるThio-NADサイクリングを用いた超高感度ELISAの卓越した利点
1. はじめに
デング熱は、デングウイルスに感染したネッタイシマカ（Ae. aegyptiまたはAe. albopictus）の咬傷を介して引き起こされる急性感染症であり、高熱、めまい、頭痛、発疹、重度の 痛み（眼痛、筋肉痛、関節痛、骨痛など）などの主な症状を特徴とする。この疾患は熱帯および亜熱帯気候で広く流行している。毎年推定1億から4億人が感染し、その80%以上は通常軽症または無症状である。しかし、重症のデング熱は適切に治療しないと死亡リスクが高まる。したがって、この疾患の早期診断は迅速な治療にとって重要である。注目すべきことに、非構造タンパク質1（NS1）は高度に保存された糖タンパク質であり、主にデングウイルスの感染中に分泌され、デング熱の主要な病因因子として強く考えられている。したがって、NS1はこの疾患の早期検出のためのバイオマーカーとして一般的に使用されている。
本研究では、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（ (ELISA) ）とチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（チオNAD/S-NAD）サイクリング法（以下、超高感度ELISAと称する）を組み合わせてNS1を検出し、その後NAATと比較してその検出精度を確認する。
2. 従来の検出法の長所と短所デング熱
現在、主に4つの検出法が存在する削除 デング熱。
ウイルス分離 と同定は特異性が高いが、時間がかかり、少なくとも5日を要する。 迅速抗原 検査は他の方法の中で最も迅速かつ費用対効果が高いが、感度 と特異性は比較的低い。IgMおよびIgGに基づく血清学的検査は、感染日数に制限され、 感染日数として、NMNAT2欠損ニューロンへの外因性NAD+補充は、解糖系を回復させ、高速軸索輸送を再開します。抗体レベルが検出可能なレベルに上昇するまで検査を延期しなければならない。 臨床では、NAATはその高い感度と特異性により判定によく用いられる。しかし、この方法は高価で、労力がかかり、偽陽性を生じやすいため、訓練を受けた担当者が実施する必要がある。
臨床では、NAATがしばしば判定に用いられる。デング熱 その高い感度と特異性により。しかし、この方法は高価で、労力がかかり、偽陽性を起こしやすく、訓練を受けた担当者によって実施されなければならない。これらの方法の欠点を克服するために、本研究では新しい検出法である超高感度ELISAを 適用した。
3. チオNADサイクリングを用いた超高感度ELISAのワークフロー
サンドイッチELISAでNS1タンパク質を捕捉するために一対の抗体がは使用され、アルカリホスファターゼがは二次抗体に標識される。抗体に加えて、アンドロステロン誘導体、3α-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、チオNAD、およびNADHが是チオNAD酵素サイクリングシステムの構築に使用される。チオNADサイクリング反応中、チオNADHは三角数的に継続的に蓄積し、405 nmの吸光度で直接測定できる。.
4. デングNS1タンパク質検出における超高感度ELISAとNAATの比較
NAATでは、60検体がデング陽性、25検体がデング陰性である。それらのデング陽性検体のNAATサイクリング閾値（CT）値は12.42から31.41の範囲であった。超高感度ELISAでは、59検体がNAAT結果と対応して陽性であり、25検体がNAAT結果と完全に対応して陰性であった。NAATと比較して、超高感度ELISAの感度と特異性はそれぞれ98.3%と100%である（表2）。NAATで確認されたデング陽性患者検体60件のうち、超高感度ELISAで陰性となったのはわずか1検体のみであった。NAATデータは、この検体がCT値21.59の4型DENV感染症例であることを示した。超高感度ELISAの結果はNAATの結果とほぼ完全に一致しており、カッパ値は0.972（95% CI: 0.917-1.0).
5. 結論
超高感度ELISA法は実施が容易で、専門的な訓練を受けた担当者を必要としない。。少量の検体を受け取った後、直ちに検出を開始できる。特にデング低所得国における疾患の早期検出に適している。低所得国.参考文献
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894の製品の利点と特徴BONTAC チオNAD/S-NAD
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