デング熱NS1タンパク質の決定における超高感度ELISAとチオNADサイクリングの卓越した利点
1. はじめに
デング熱は急性感染症で、デング熱ウイルス感染したイーデス属(Ae. aegypti または Ae. albopictus)の蚊の刺傷によって、主な症状は高熱、めまい、頭痛、発疹などです。重度 痛み(目、筋肉、関節、骨の痛みなど)など。この病気は熱帯および亜熱帯気候で広く蔓延しています。年間推定1億から4億人が感染しており、そのうち80%以上は通常軽症で無症状です。それでも、重度のデング熱は適切に治療されなければ死亡リスクを高める可能性があります。したがって、この病気の早期診断は、迅速な治療にとって重要です。注目すべきは、高度に保存された糖タンパク質である非構造タンパク質1(NS1)が主に以下の感染時に分泌されることです。デング熱ウイルスは、 の主要な病因因子として集中的に考えられていますデング熱.したがって、NSIはこの疾患の早期発見のためのバイオマーカーとして一般的に用いられます。
本研究では、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイを用いた (エリサ) と組み合わせてチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(THIO-NAD/S-NAD)サイクリング方法 (以下、超感度ELISAと呼びますはNSI検出に用いられ、その後NAATと比較して検出精度を確認します。
2. 従来の検出方法の利点と欠点デング熱
現在、tここに4つの主要な検出方法を示しますに対して デング熱。
ウイルス分離 識別は特異性が高いものの、時間がかかり、少なくとも5日かかります。その 急速抗原 他の方法の中で最も速く、かつコスト効率が良い検査ですが、感度は 特異性は比較的低いです。IgMおよびIgGに基づく血清学的検査は、以下に制限されます。 感染日数、その抗体のレベルに達するまで検査は遅らせる必要があります 検出可能なレベルまで上昇します。
臨床では、NAATが判定にしばしば適用されますデング熱 その高感度と特異性の土壌によって。しかし、この方法は費用がかかり、手間がかかり、偽りのポジティブになりやすいため、訓練を受けたスタッフがそれを実行しなければなりません。これらの方法の欠点を克服するために、新しい検出方法超高感度ELISAは 本研究に応用されました。
3. 超高感度ELISAとチオ-NADサイクリングのワークフロー
抗体のペアはサンドイッチのNS1タンパク質を捕捉するために使用されます。ELISAおよびアルカリホスファターゼは二次抗体に標識されています。抗体のほかに、アンドロステロン誘導体である3α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素、チオ-NAD、NADHがありますですチオ-NAD酵素のサイクリックシステムを構築するために用いられました。チオ-NADのサイクル反応中、チオ-NADHは三角形の数状に絶えず蓄積し、405 nmの吸収率で直接測定できました.
4. デング熱NS1タンパク質検出における超高感度ELISAとNAATの比較
NAATでは、60点の標本がデング熱陽性、25匹がデング熱陰性です。これらのデング陽性標本のNAATサイクリング閾値(CT)値は12.42から31.41の範囲でした。超高感度ELISAでは、59点の標本がNAAT結果に対応して陽性を示し、25点が完全に陰性です。NAATと比較して、超感度ELISAの感度はそれぞれ98.3%と100%です(表2)。NAATで確認されたデング熱陽性患者60件のうち、超高感度ELISAで陰性となった標本はわずか1件です。NAATのデータによると、この標本はCT値21.59のタイプ4 DENV感染症例です。超感度ELISAの結果はNAATの結果とほぼ完全に一致しており、カッパ値は0.972(95%信頼区間:0.917)-1.0).
5. 結論
Ultrasensitive ELISA法は実施が容易で、専門の研修生の操作を必要としません.T検出は、少量のサンプルを受け取った直後に開始可能です。特にデング熱病気低所得国.参考文献
Chen, Po-Kai ら「超高感度ELISAを用いたThio-NADサイクリングを用いたデング熱NS1タンパク質の先進検出法」ウイルス誌 第15巻第9期 1894年。2023年9月8日、doi:10.3390/v15091894製品の利点と特徴ボンタック・ティオナド/S-ナド
ボンタック はo数少ない企業の一つです。中国これによりチオ-NADが生成されます、「ボンザイム」 全酵素法 (環境に優しい;有害な溶媒残留物はありません) 独自の「ボンピュア」7段階浄化技術。BONTACは研究開発、生産、販売を統合しています。 自社工場や複数の国際認証を取得し、高品質かつ安定した供給を確保しています.
