1月1日
デング熱NS1タンパク質の決定におけるThio-NADサイクリングを用いた超高感度ELISAの並外れたメリット
1. イントロダクション
デング熱は、デング熱によって引き起こされる急性感染症です。 デングウイルス感染したネッタイシマカ(Ae. aegyptiまたはAe. albopictus)の蚊に刺されることで、 高熱、めまい、頭痛、発疹などの主な症状があります。 重度痛み(目、筋肉、関節、骨の痛み)などこの病気は、熱帯および亜熱帯の気候で広く蔓延しています。毎年推定1億人から4億人が感染しており、その80%以上は通常軽症で無症状です。それにもかかわらず、重度のデング熱は、適切に治療しないと死亡のリスクを高める可能性があります。したがって、この疾患の早期診断は、そのタイムリーな治療にとって重要です。注目すべきは、高度に保存された糖タンパク質である非構造タンパク質1(NS1)は、主に感染中に分泌されることです。 デング 熱 ウイルスこれは、主な病因因子として集中的に考えられています。 デング熱.したがって、NSIは一般的にこの疾患の早期発見のためのバイオマーカーとして使用されます。
この研究では、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISAの)と組み合わせて チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(チオ-NAD/S-NAD) サイクリング方法(以下、超高感度ELISAと呼ぶ)を使用してNSIを検出し、その後、NAATと比較してその検出精度を確認します。
2.従来の検出方法の長所と短所 デング熱
現在、tここでは、主な検出方法を4つ紹介します 対して デング熱。
ウイルスの単離と同定は特異性が高いですが、時間がかかり、少なくとも5日かかります。迅速抗原検査は、他の方法の中で最も速く、最も費用対効果が高いですが、感度と特異性は比較的低いです。IgMおよびIgGに基づく血清学的検査は、感染日数によって制限されます。 ザ 抗体のレベルが検出可能なレベルまで上昇するまで、テストを遅らせる必要があります。
クリニックでは、NAATはしばしば決定するために適用されます デング熱その高い感度と特異性の汚れによって。ただし、この方法は高価で手間がかかり、誤った陽性になりやすいため、訓練を受けた担当者が実施する必要があります。 これらの方法の欠点を克服するために、新しい検出方法 超高感度ELISAは この研究に適用されました。
3. thio-NADサイクルを用いた超高感度ELISAのワークフロー
抗体のペア ですサンドイッチELISAのNS1タンパク質、およびアルカリホスファターゼの捕捉に使用されます です二次抗体に標識されています。抗体以外にも、アンドロステロン誘導体、3α-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、チオ-NAD、およびNADHがあります アールチオNAD酵素サイクリングシステムの構築に使用されます。チオNADサイクリング反応中、チオNADHは常に三角数で蓄積し、405nmの吸光度で直接測定することができました.
4. デング熱NS1タンパク質の検出における超高感度ELISAとNAATの比較
NAATでは、60の検体がデング熱陽性で、25の検体がデング熱陰性です。これらのデング熱陽性検体のNAATサイクリング閾値(CT)値は、12.42から31.41の範囲でした。 超高感度ELISAでは、59個の検体がNAATの結果に対応して陽性であるのに対し、25個の検体はNAATの結果に対して完全に陰性です。NAATと比較して、超高感度ELISAの感度と特異性はそれぞれ98.3%と100%です(表2)。NAATで確認されたデング熱陽性の患者検体60例のうち、超高感度ELISAで陰性だったのは1例のみである。NAATのデータによると、検体はCT値が21.59の4型DENV感染例であることが示されました。超高感度ELISAの結果はNAATの結果とほぼ完全に一致しており、κ値は0.972(95%CI:0.917-1.0).
5. まとめ
超高感度ELISA法は、簡単に実行でき、専門の研修医が操作する必要はありません。小さなサンプルを受け取った直後に検出を開始できます。特に、低所得国におけるデング熱の早期発見に適しています。参考
「超高感度ELISAとThio-NADサイクリングを使用したデング熱NS1タンパク質の高度な検出方法」。ウイルス、第15巻、9、1894年。2023年9月8日, doi:10.3390/v15091894製品の利点と特徴 BONTAC チオナド/S-ナド
ボンタック はoです数少ない企業のNE 中国Thio-NADを生成できるもので 「ボンザイム」全酵素法(環境にやさしい;有害な溶剤の残留物はありません) と 独自の「Bonpure」7段階の精製技術。BONTACは、研究開発、生産、販売を統合しています。 自社工場と多数の国際認証により、高品質で安定した製品供給を確保.