生体試料中のNMNを科学的に定量する方法

1. イントロダクション

の補足 ニコチンアミドモノヌクレオチド(NMN) ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD +)のレベルをアップレギュレートすることは、有望なアンチエイジング介入であることが明らかになりました。しかし、NAD+中間体を正確に定量することは依然として深刻な課題であり、 NMNの 特に。この研究は、以下を正確に定量するための新しい方法、二重同位体媒介 LC-MS/MS 法(dimeLC-MS/MS)を紹介することを目的としています。 NMNの 生物学的サンプルで。

2. NMNの正確な検出に影響を与える要因

NMNは、酵素分解、サンプル処理における変換、さまざまなカラムや抽出条件での複雑な挙動、およびマトリックス効果に対する脆弱性のため、正確に検出することは困難です。


具体的には、NMNは高極性、低揮発性という特性を持ち、水には溶けやすいが有機溶媒には溶けにくいという特徴があります。これらの特性は、多くの従来の定量分析法の適用を大幅に制限します。

Biological サンプル とか血液はCD38およびCD73(ecto-5’-ヌクレオチダーゼ)、どちらもNMNを基質として使用できます。

カラム中のNMNの挙動は非常に複雑で、おそらくその電荷が二部構造であるため、抽出条件やカラム条件の微妙な違いがNMNの信頼性と精度に大きく影響します。

3. 対処戦略 dimeLC-MS/MSのインパクトファクターの影響を軽減するため

上記の要因の干渉を避けるために、プロトタイプカラムNMN-2が適用されます。このカラムには、炭素粒子よりも親水性化合物に結合する能力が高いC18ベースの高純度シリカ粒子が含まれており、分離能力が向上します。

過塩素酸(PCA)は、血漿などの生体試料からNAD+やNMNを効率よく抽出し、損失を最小限に抑えることができるため、過塩素酸(PCA)が用いられています。

マトリックス効果を調整するために、PCA抽出の前に、各同位体化合物の固定量(1 μM)を生体サンプルに添加します。

4. 利点sdimeLC-MS/MSの

LC-MS/MS 駆動法の NMN (M + 14) および NMN (M + 5) の二重同位体 NMN 標準試料は、サンプル処理中の NMN の運命を正確に追跡できるため、生体サンプル中の NMN 測定の精度と信頼性が大幅に向上します。さらに、dimeLC-MS/MSは、さまざまな種類の生体サンプル中のNMNの抽出効率と絶対濃度を評価できます。

5. まとめ

番目です新しいLC-MS/MS-二重同位体NMN標準試料を用いた駆動法により、生体サンプル中のNMNを正確かつ確実に測定することができます。NMN摂取量に関する将来の研究にお役立てください。

6. 参考

Unno, Junya et al. "Absolute quantification of nicotinamide mononucleotide in biological samples by double isotope-mediated liquid chromatography-tandem mass spectrometry (dimeLC-MS/MS)" npj aging vol. 10,1 2.2024年1月2日, doi:10.1038/s41514-023-00133-1

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