生体試料中のNMNを定量化する科学的方法
1. はじめに
の補足ニコチンアミドモノヌクレオチド(NMN)ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド (NAD+) のレベルをアップレギュレートするために、有望なアンチエイジング介入であることが明らかになりました。しかし、NAD+中間体を正確に定量することは依然として深刻な課題であり、NMNの特に。この研究は、新しい方法である二重同位体を介したLC-MS/MS法(dimeLC-MS/MS)を導入するために、NMNの生物学的サンプルで。
2. NMNの正確な検出に影響を与える要因
NMN は、酵素分解、サンプル処理における変換、さまざまなカラムおよび抽出条件での複雑な挙動、およびマトリックス効果に対する脆弱性により、正確に検出することが困難です。
具体的には、NMNは高極性、低揮発性という性質を持ち、水には溶けやすいが有機溶媒には溶けにくいです。これらの特性により、多くの従来の定量分析方法の適用が大幅に制限されます。
Bイオロジーサンプルとか血液は CD38 および CD73 の重要な活性を運びます (ecto-5’-ヌクレオチダーゼ)、どちらもNMNを基質として使用できます。
カラム内のNMNの挙動は非常に複雑であり、おそらくその電荷が二分であるため、抽出とカラム条件の微妙な違いがNMNの信頼性と正確な検出に大きく影響します。
3. 対処戦略ダイムLC-MS/MSインパクトファクターの影響を軽減するため
上記の要因の干渉を回避するために、プロトタイプカラムNMN-2が適用されます。このカラムには、炭素粒子よりも親水性化合物に結合する能力が高いC18ベースの高純度シリカ粒子が含まれており、分離能力が向上しています。
過塩素酸 (PCA) は、血漿などの生体サンプルから最小限の損失で NAD+ と NMN を効率的に抽出できるため、採用されています。
マトリックス効果を調整するために、PCA抽出の前に、各同位体化合物を固定量(1 μM)を生体サンプルに添加します。
4. 利点sダイムLC-MS/MS
LC-MS/MS 駆動の方法論における二重同位体 NMN 標準物質である NMN (M + 14) および NMN (M + 5) は、サンプル処理中の NMN の運命を正確に追跡できるため、生体サンプル中の NMN 測定の精度と信頼性が大幅に向上します。さらに、dimeLC-MS/MSは、さまざまな種類の生体サンプル中のNMNの抽出効率と絶対濃度を評価できます。
5. まとめ
番目です新しいLC-MS/MS-二重同位体NMN標準試料を用いた駆動型方法論により、生体試料中のNMNを正確かつ確実に測定できます。今後のNMN摂取に関する研究に活用できます。
6. 参考
Unno, Junya et al. "二重同位体媒介液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析 (dimeLC-MS/MS) による生体サンプル中のニコチンアミド モノヌクレオチドの絶対定量化." npj aging vol. 10,1 2.2024年1月2日 doi:10.1038/s41514-023-00133-1
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